10.12007/j.issn.0258-4646.2016.07.007
RNA干扰下调MBP-1对骨肉瘤Saos-2细胞生物学的影响
目的:探讨c?myc启动子结合蛋白1(MBP?1)基因沉默对人骨肉瘤Saos?2细胞生长的影响。方法实验分为3组:正常对照组(未转染骨肉瘤细胞)、阴性对照组(转染错义序列组)和沉默组(转染MBP?1 shRNA组)。设计2条MBP?1基因的RNA干扰片段及1条阴性对照siRNA,并与pSIREN?retroQ质粒连接。将重组pSIREN?retroQ质粒通过Lipofectamine 2000脂质体转染骨肉瘤Saos?2细胞。实时PCR和Western blot分别检测MBP?1表达。CCK?8法对MBP?1沉默后骨肉瘤Saos?2细胞生长进行检测。Western blot检测对照组和沉默组cyclin D1和cyclin E的表达。结果通过PCR扩增及测序,说明已成功构建MBP?1沉默及对照重组pSIREN?retroQ 质粒。实时PCR结果显示,沉默组MBP?1 mRNA相对表达量与对照组相比显著下调(P<0.05)。Western blot结果显示,沉默组MBP?1蛋白表达量与对照组相比也显著下调。CCK?8法结果表明,沉默组细胞在48、72和96 h时增殖能力均比对照组显著升高(P<0.05)。沉默组cyclin D1和cyclin E的表达显著高于对照组(P<0.05)。结论 MBP?1基因沉默后骨肉瘤Saos?2细胞生长被明显促进,为寻找骨肉瘤基因治疗新靶点打下基础。
骨肉瘤Saos-2细胞、RNA干扰、c-myc启动子结合蛋白1、细胞生长
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R738.3(肿瘤学)
甘肃省自然科学研究基金计划一般项目1308RJZA152
2016-07-27(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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