随机转座子插入构建甲型副伤寒杆菌启动子文库

摘要：

目的 构建携带氯霉素乙酰转移酶(CAT)的转座子自杀性质粒,通过接合转座获得甲型副伤寒沙门氏菌(副甲)启动子文库.方法 PCR扩增CAT的基因亚克隆至pMD-18T载体,鉴定正确后酶切插入转座子自杀性质粒pSC189,获得新的转座子载体pSC-CAT,将携带pSC-CAT的供体菌与副甲受体菌进行接合转座,涂布氯霉素平板筛选转座的细菌,以随机筛选出来的细菌基因组为模板,热不对称PCR扩增插入位点侧翼序列,并进行测序、比对分析.结果 筛选获得约l 000个突变菌,随机挑取6个菌,转座子插入位点的上游分别对应6个可疑启动子区域.结论 通过自杀性转座子载体pSC-CAT可高效获得副甲菌启动子文库,为进一步研究副甲菌基因表达与调控奠定了基础.

关键词：甲型副伤寒沙门氏菌、氯霉素乙酰转移酶、pSC189、接合转移转座

所属期刊栏目：45

分类号：R378.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金31160193;云南省教育厅科学研究基金重点项目2015Z168;云南省应用基础研究面上项目2010ZC055,2012FB135

在线出版日期：2016-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：7-11