小鼠性激素结合球蛋白条件基因打靶载体的构建

摘要：

目的：构建小鼠性激素结合球蛋白（Shbg）条件基因打靶载体。方法运用ET克隆的方法构建Shbg基因第4?7号外显子两侧插入loxp位点的条件性剔除载体。首先以BAC DNA为模板克隆出Shbg及其上、下游基因并打靶质粒载体（pBR322?MK?AB），利用该质粒和BAC克隆，通过同源重组方式，获得套取质粒（pBR322?Shbg?Re）；再分别以PL452及PL451为模板扩增出含Neo片段，经过再一轮的Red/ET重组成功实现条件性基因敲除打靶载体（pBR322?MK?SHBG?cko）的构建。结果经多个限制性内切酶酶切鉴定和测序证实，构建的pBR322?MK?AB、pBR322?Shbg?Re、SHBG?Ln重组质粒和Shbg条件基因打靶载体（pBR322?MK?SHBG?cko）结构正确，与设计相符。结论成功构建了小鼠Shbg条件基因打靶载体，为后续Shbg基因条件敲除小鼠模型的构建奠定了基础。

关键词：性激素结合球蛋白、条件性基因敲除、载体、Red/ET重组

分类号：Q782;R394-33;R394.2(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金81170591；81300511；沈阳市科学技术计划项目F11-262-9-46

在线出版日期：2015-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：203-208,213