人巨细胞病毒UL141编码蛋白相互作用蛋白的筛选和分析
目的 应用酵母双杂交技术筛选人胎脑cDNA文库中与人巨细胞病毒(HCMV) UL141编码蛋白相互作用的蛋白,以进一步研究HCMV UL141的生物学功能,为揭示HCMV先天感染机制奠定基础.方法 采用PCR技术扩增HCMV UL141基因片段,将其插入到pGBKT7载体中,构建成诱饵质粒pGBKT7-UL141.然后将pGBKT7-UL141转化到酵母感受态细胞AH109中,于一缺培养基(SD/-Trp)上筛选生长.再将人胎脑cDNA文库质粒转化到含有pGBKT7-UL141质粒的AH109菌株中,在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)中筛选相互作用的人胎脑cDNA文库蛋白.通过显色反应挑选显蓝色的阳性克隆,提取相应质粒将其转化到大肠杆菌中,并进行回转验证.最后对筛选得到的阳性克隆进行测序及生物信息学分析.结果 诱饵质粒pGBKT7-UL141构建成功.筛选获得6个克隆与HCMV UL141编码蛋白相互作用,其中1个基因编码人类染色质解旋酶DNA结合蛋白3(CHD3).结论 成功应用酵母双杂交系统筛选出与HCMV UL141编码蛋白相互作用的人体组织蛋白—CHD3,提示UL141蛋白可能与病毒的免疫逃避,干扰正常细胞的生长、分化相关.
人巨细胞病毒、UL141蛋白、酵母双杂交系统、人胎脑cDNA文库
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R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金81171581
2013-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
865-868,872
