pAcGFP1-C1-Ngb真核表达载体的构建及在SH-SY5Y细胞中的表达

摘要：

目的 克隆SD大鼠脑红蛋白(Ngb)基因至真核表达载体pAcGFP1-C1,构建表达质粒pAcGFP1-C1-Ngb,并转染至人SH-SY5Y细胞表达Ngb蛋白.方法 提取大鼠肝脏组织总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增大鼠Ngb基因,与双酶切的pAcGFP1-C1连接,从而构建pAcGFP1-C1-Ngb真核表达质粒.转染SH-SY5Y细胞,并用Western blot的方法鉴定Ngb蛋白在SH-SY5Y细胞中的表达.结果 获得SD大鼠Ngb基因全长序列和重组真核表达载体pAcGFP1-C1-Ngb.Western blot结果显示,转染pAcGFP1-C1-Ngb后的SH-SY5Y细胞Ngb基因有稳定的表达.结论 成功地克隆了SD大鼠Ngb基因、构建了pAcGFP1-C1-Ngb真核表达载体,并在人SH-SY5Y细胞中获得Ngb蛋白的稳定表达,为进一步研究Ngb基因在细胞中的功能奠定了基础.

关键词：Ngb、载体构建、SH-SY5Y细胞、转染

所属期刊栏目：42

分类号：Q253;Q279(细胞生理学)

在线出版日期：2013-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：172-174,182