ABCE1基因siRNA稳定转染小细胞肺癌细胞株阳性克隆的筛选

摘要：

目的 构建携带绿色荧光蛋白的ABCE1基因的siRNA表达载体,通过将载体转染入小细胞肺癌细胞株NCI-H446,筛选稳定转染细胞株.方法 根据ABCE1的DNA序列设计3对siRNA引物,构建可用于筛选阳性克隆且带有绿色荧光的ABCE1基因siRNA表达载体ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-1、ABCE1-PRNAT-U6.1/Neo-siRNA-2及ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-N,采用FUGENE-HD法将载体转染入NCI-H446细胞中,并以G418进行阳性克隆筛选,筛选ABCE1基因沉默的稳定转染细胞系.结果 经酶切和DNA测序验证,证实ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA表达栽体构建成功.将ABCE1基因siRNA表达载体成功转染小细胞肺癌细胞NC1-H446后,小细胞肺癌细胞内可见绿色荧光,通过G418筛选,获得了ABCE1基因沉默的小细胞肺癌细胞系.该细胞系的ABCEl水平明显低于未转染siRNA的小细胞肺癌细胞.结论 成功的构建了ABCE1基因siRNA表达载体ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA.筛选出ABCE1基因沉默的稳定转染小细胞肺癌细胞系,为今后应用ABCE1基因siRNA表达载体研究ABCE1基因的作用机制提供实验基础.

关键词：小细胞肺癌、ABCE1基因、siRNA

所属期刊栏目：40

分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：辽宁省教育厅高校科研计划项目L2010302

在线出版日期：2013-02-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：8-11