靶向整合于MHCC 97-H细胞的HBx基因shRNA表达载体的构建和鉴定

摘要：

目的 构建靶向整合于人肝癌MHCC97-H细胞乙型肝炎病毒x基因(HBx gene)基因的shNA真核载体.方法 依据从人肝癌细胞株MHCC97-H中克隆的HBx基因序列,设计合成X169,X220及MOCK(无关对照)3对寡核酸,经退火成互补双链并克隆至pGenesiH载体;经酶切、PCR和测序鉴定;将鉴定的shRNA质粒脂质体转染MHCC97-H细胞,流式细胞分析转染效率.结果 酶切、PCR及测序证实pshRNA-X169/X220/MOCK质粒构建符合设计,转染48 h后MHCC97-H细胞可激发绿色荧光,pshRNA-X220转染效率最低.结论 成功构建靶向整合于人肝癌细胞HBVx基因特异性sRNA表达载体,并成功转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞,为沉默HBx基因实验性肝癌基因治疗奠定基础.

关键词：RNA干扰、短发夹RNA、乙型肝炎病毒、x基因、MHCC97-H细胞、整合

所属期刊栏目：37

分类号：A5126

资助基金：国家自然科学基金资助项目30371402

在线出版日期：2009-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：445-447,451