人3突变型低氧诱导因子1 α真核表达载体和腺病毒表达载体的构建及鉴定

摘要：

目的 为了深入研究人低氧诱导因子1α基因对冠心病的血管新生作用,构建人3突变型低氧诱导因子1α腺病毒表达栽体(pAdeno-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803).方法 双酶切pShuttle2-HIF-1α-Ala402-AlaS64、pShuttle2-HIF-1α-Ala564-Ala803,凝胶回收前者酶切片段中大小为300 bp的小片段及后者酶切片段中大小为6 300 bp的大片段,并将两者连接,重组成3突变型穿梭质粒pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803,并进行酶切和PCR鉴定.鉴定正确后,采用分子克隆技术,以PI-SceI和Ⅰ-CeuI双酶切重组3突变型穿梭载体,获得含有3突变型HIF-1α(pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803)的表达盒,通过体外连接法与线性化的腺病毒骨架载体Adeno-XTM Viral DNA连接,重组成3突变型腺病毒我体(pAdeno-HIF-1α-Ala402-AlaS64-Ala803).再进行酶切及测序鉴定.结果 经酶切鉴定及基因测序证实重组3突变型真核表达载体和腺病毒表达载体质粒构建成功.结论成功构建重组人3突变型低氧诱导因子1α真核表达载体(pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803)和人3突变型低氧诱导因子1α腺病毒表达载体(pAdeno-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803).

关键词：低氧诱导因子-1α、基因治疗、血管新生、载体

所属期刊栏目：37

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30370587

在线出版日期：2008-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：86-89