mTOR反义RNA真核表达载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

摘要：

目的:构建哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的反义RNA真核表达载体,观察其对血管平滑肌细胞(VSMC)功能的影响.方法:提取人VSMC总RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增mTOR基因cDNA序列,经pGEM-T载体克隆后双酶切,将cDNA序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGP-C1,构建mTOR基因反义RNA真核表达载体.转染VSMC,采用Westem blot法检验反义表达载体对mTOR蛋白表达的影响,流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果:经RT-PCR获得664 bp产物,T载体克隆后,经DNA测序,确定该片段为mTOR基因cDNA,进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-mTOR,测序证明序列正确后转染VSMC,证实其能够显著抑制mTOR蛋白产物表达,VSMC的分裂、增殖过程受阻.结论:已经成功构建mTOR基因的反义RNA真核表达载体.

关键词：雷帕霉素靶蛋白、反义技术、基因表达载体

所属期刊栏目：35

分类号：Q753(分子遗传学)

资助基金：国家自然科学基金30400435;30371401;辽宁省博士科研项目20041053

在线出版日期：2006-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：337-339