10.3969/j.issn.1008-0589.202308004
柴胡皂苷体内外抗鸡柔嫩艾美耳球虫的研究
为了探究柴胡皂苷对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)体内外感染的影响,本实验采用CCK-8法检测2倍倍比稀释(0.384 g/L～0.0645 g/L)的柴胡皂苷对MDBK细胞活力的影响,结果显示,浓度为0.0645 g/L的柴胡皂苷对MDBK细胞的活力影响最小,并且可以促进细胞的生长,因此以该浓度的柴胡皂苷进行后续试验.本研究设置阴性对照组(NC)、E.tenella感染组(PC)、磺胺嘧啶钠对照组(WM)以及柴胡皂苷治疗组(CA).除NC组外,每组细胞加入1.6×106个E.tenella子孢子,4h后WM组加入0.5 g/L磺胺嘧啶钠,CA组加入0.0645 g/L柴胡皂苷,继续培养至不同时间,分别提取4组细胞蛋白,通过western blot检测感染E.tenella的MDBK细胞中p65蛋白的磷酸化水平;采用荧光定量PCR(qPCR)检测4组细胞中炎症因子的转录水平.Western blot结果显示,培养至24h时,4组细胞中p65蛋白磷酸化水平均无显著差异;感染48h与72h时,与WM和PC组相比,CA组细胞中p65蛋白磷酸化水平极显著降低(P＜0.001),但与NC组之间无显著差异(培养48 h)和极显著高于NC组(P＜0.001,培养72h).qPCR结果显示,培养24h和48h,各组细胞中各细胞因子的相对转录水平虽有不同,但在培养72h时,与PC组和WM组相比,CA组MDBK细胞中促炎因子IL-1β、IL-8、TNF-α mRNA的转录水平极显著降低(P＜0.001);24h时,CA组细胞中抑炎因子IL-10 mRNA的转录水平极显著低于WM组(P＜0.0001),但在48 h和72 h时,IL-10 mRNA的转录水平逐渐升高,并极显著高于其他3组(P＜0.0001).将13日龄白羽肉鸡设为上述4个组.除NC组外,每组雏鸡均口服感染2x104个E.tenella孢子化卵囊.感染后2d,CA组雏鸡口服0.0645 g/L柴胡皂苷,1 mL/只,WM组雏鸡口服0.5 g/L磺胺嘧啶,1 mL/只,共服用7d.感染后4d～8d,采用血球计数板计算每组鸡粪便卵囊排出率.感染后8d将各组鸡称重后剖杀,观察盲肠的剖检病变,并通过计算各组肉鸡的相对增重率、存活率、卵囊值以及盲肠病变值计算每组雏鸡的抗球虫指数(ACI);分别于感染后4d、6d和8d分别剖杀10只鸡,取盲肠组织制备病理切片,观察各组鸡盲肠组织的病变.结果显示,CA组鸡粪便卵囊排出率为22.00％,极显著低于PC组(P＜0.0001),极显著高于WM组(P＜0.0001);ACI为173.13,极显著高于PC组和WM组(P＜0.0001),达到中效抗球虫水平;剖检病变观察可见PC组雏鸡的盲肠肠壁变薄,长度变短,高度肿胀,而CA组鸡盲肠肠壁逐渐恢复正常形态,与WM组雏鸡盲肠改善结果接近;组织病变可见,与PC组和WM组相比,CA组盲肠无炎性细胞浸润且肠绒毛肠壁形态完整,未观察到E.tenella裂殖子.以上结果首次证实柴胡皂苷在体内外均可有效抑制E.tenella对细胞的感染,并且能够改善与修复E.tenella对雏鸡盲肠的损伤,本研究为天然中药成分用于治疗E.tenella的感染提供参考依据.
柴胡皂苷、柔嫩艾美耳球虫、p65蛋白的磷酸化、NF-κB信号通路
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S858.31(动物医学（兽医学）)
吉林省科技发展计划项目;吉林省教育厅科学技术研究项目
2024-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
621-629
