猪急性腹泻综合征冠状病毒S1蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

摘要：

为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒pCAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白.转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTM Excel亲和层析柱纯化,浓缩后的蛋白经SDS-PAGE、western blot鉴定显示获得了分子量约为130 ku且大于理论大小的重组S1蛋白,表明该蛋白为分泌表达且具有良好的翻译后修饰.利用获得的重组S1蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,初步建立了 SADS-CoV S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法.该方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)阳性血清均无交叉反应,仅与SADS-CoV阳性血清反应,表明该方法特异性较强;该方法检测SADS-CoV阳性血清,当稀释至1:3 200时仍为阳性,表明该方法具有较高的敏感性;对4份阳性血清的批内和批间重复性试验的变异系数均小于10％,表明该方法具有良好的重复性和稳定性;利用该方法和间接免疫荧光试验(IFA)对50份临床样品检测,结果显示该间接ELISA检测到9份阳性样品,41份阴性样品;IFA检出5份阳性样品,45份阴性样品,二者的总符合率为92％.综上表明,本研究建立的间接ELISA检测方法能够特异、灵敏地检测SADS-CoV S1蛋白抗体,可以用于SADS-CoV灭活疫苗的免疫效果评价以及该病原的血清学流行病学调查和免疫水平监测,为SADS-CoV所致疫病的鉴别诊断和防控奠定基础.

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒、S1蛋白、间接ELISA方法、抗体检测

所属期刊栏目：46

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;广西兽医生物技术重点实验室开放基金项目;中国农业科学院基本科研业务费

在线出版日期：2024-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：608-613