牛呼吸道合胞体病毒的恒温隔绝式荧光RT-PCR检测方法的建立及应用

摘要：

为建立检测牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)的恒温隔绝式RT-PCR(iiRT-PCR)方法,本研究根据BRSV N基因序列设计并合成一对引物和探针,通过反应体系和条件的优化,初步建立了检测BRSV的iiRT-PCR方法.利用该方法对BRSV、牛病毒性腹泻/粘膜病病毒(BVDV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛鼻病毒(BRV)、牛腺病毒3型(BAV-3)、多杀性巴氏杆菌(P.multocida)、溶血性曼氏杆菌(M.haemolytica)和牛支原体(M.Bovis)等临床可引起牛呼吸道疾病综合征的病原检测,结果显示,该方法仅特异性检测BRSV,对其它病原检测结果均为阴性,特异性强;将BRSV重组质粒标准品10倍倍比稀释(3.45×105拷贝/μL～3.45×10-1拷贝/μL)后,利用该方法分别检测,结果显示,该方法对该重组质粒标准品的检测限为3.45拷贝/μL,敏感性高;重复性试验结果显示,批内重复性变异系数为1.92％～2.12％,批间重复性变异系数为1.67％～1.89％,重复性好.采用该iiRT-PCR方法和文献报道的3种方法同时对采自5个省146份肉牛呼吸道疾病患牛的鼻腔拭子和40份牦牛肺脏样品进行检测,结果显示,本实验建立的iiRT-PCR方法对146份鼻腔拭子中BRSV的平均检出率为36.30％,场阳性率为75.00％,5个省均有检出;牦牛肺脏样品中BRSV的检出率为45.00％,场阳性率为100％,该结果首次证实BRSV在牦牛中的存在和流行.另外本实验建立的方法对临床样品的检出率高于其他3种方法.本实验建立的iiRT-PCR方法配合使用PetNAD核酸萃取试剂盒和POCKITTM手持式核酸分析仪能够对BRSV现场检测,结果显示其与实验室检测结果一致.本研究为BRSV的快速检测提供了有利工具,丰富了国内BRSV的流行病学资料.

关键词：牛呼吸道合胞体病毒、恒温隔绝式PCR、现场检测

所属期刊栏目：45

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;现代农业产业技术体系;四川省高等学校重点实验室-动物医学实验室

在线出版日期：2023-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：144-149