10.3969/j.issn.1008-0589.202002024
猪源产肠毒素大肠杆菌菌毛基因多重PCR检测方法的建立及初步应用
为建立一种可同时快速准确检测5种菌毛类型的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的多重PCR方法,本研究首先通过大肠杆菌特异性基因uidA的PCR方法鉴定大肠杆菌;选取国内外流行的携带K88、K99、F18ab、F18ac和F41菌毛基因的ETEC菌株,根据这5种菌毛基因的保守序列设计5对特异性引物,通过对反应条件的优化,建立了能同时检测上述5种菌毛ETEC的多重PCR方法.uidA基因的PCR结果显示,除了大肠杆菌有特异性扩增外,其他细菌均不能扩增,可以用于大肠杆菌的鉴定.菌毛多重PCR优化后的反应条件为:各混合菌毛基因引物终浓度为3.2μmol/L,各大肠杆菌混合DNA模板浓度为2.5×107拷贝/μL,退火温度为58℃;特异性试验结果显示,该多重PCR方法能够特异性扩增5种ETEC的菌毛基因,而猪源沙门氏菌、猪源链球菌和大肠杆菌DH5α未见扩增,特异性强;敏感性试验结果显示,该方法对携带5种菌毛的大肠杆菌基因组DNA的最低检测量均为2.5×104拷贝/μL,敏感性较高.采用uidA基因的PCR方法检测了河北省腹泻致死仔猪脏器分离的101株细菌,结果均为大肠杆菌.采用该多重PCR方法和单一PCR方法分别检测这101株大肠杆菌的菌毛类型,结果显示二者的符合率为100％;检测结果还显示,河北省仔猪腹泻大多数为携带3种及3种以上菌毛的ETEC混合感染所致,且ETEC携带的优势菌毛类型为K88、K99、F18ab和F41.综上所述,本研究为猪源ETEC菌毛分型及该病的临床诊断、流行病学调查提供了快速准确的鉴定方法.
猪、产肠毒素大肠杆菌、uidA、菌毛、多重PCR
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S852.61(动物医学（兽医学）)
河北省高等学校青年拔尖人才项目;河北省留学人员科技活动择优资助项目;河北农业大学引进留学博士专项;河北省自然科学基金
2021-01-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
1134-1139
