M蛋白携带TC标签的重组新城疫病毒的构建及生物学特性鉴定

摘要：

基质蛋白(M)是新城疫病毒(NDV)重要的结构蛋白.为监测NDV感染后M蛋白在细胞中的动态分布,本研究利用反向遗传操作技术,在NDV La Sota株全长cDNA中M基因编码区的C端插入由18个核苷酸编码的TC (Tetracysteine)标签,转染细胞经筛选获得携带TC标签的重组病毒La Sota-M-CTC.生长曲线测定结果显示,La Sota-M-CTC能够在鸡胚中有效复制,其生长曲线与亲本病毒La Sota相似.通过接种鸡胚测定鸡胚平均死亡时间检测La Sota-M-CTC的毒力.结果 显示,La Sota-M-CTC的毒力与La Sota基本一致.此外,TC标签能够在重组病毒中稳定存在.将La Sota-M-CTC感染的细胞用双砷绿色染料FIAsH-EDT2染色后经激光共聚焦检测M蛋白在细胞中的分布.结果 显示,在La Sota-M-CTC感染细胞后1 h～2 h时,M蛋白主要分布于细胞质中,而在病毒感染4h后M蛋白进入细胞核中,并持续存在至病毒感染后的12 h.本研究为监测M蛋白在NDV感染过程中的动态分布以及阐明M蛋白在NDV感染中的作用机制提供了实验依据.

关键词：新城疫病毒、TC标签、M蛋白、细胞定位

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分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2018YFD0501302;国家自然科学基金31872504

在线出版日期：2019-12-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：777-782