基于RNAscope(R)原位杂交技术对PRRSV感染组织样本的检测分析

摘要：

为扩大RNAscope(R) 原位杂交技术(RNAscope(R) ISH)在猪繁殖与呼吸综合征病-毒(PRRSV)基础研究中的应用范围,本研究将该技术与免疫组织化学技术(IHC)相结合,通过条件优化建立了RNAscope(R)ISH-IHC双重染色技术.经检测不同病毒感染的组织切片中的PRRSV表明该技术具有良好的特异性.采用该双重染色技术检测PRRSV感染的猪淋巴结组织切片中巨噬细胞感染PRRSV情况,结果显示PRRSV核酸主要存在于巨噬细胞胞浆中,在胞核中也有分布,但在一些非巨噬细胞中也散在PRRSV阳性信号,表明PRRSV不仅在猪淋巴结巨噬细胞中复制.利用该双重染色技术检测PRRSV感染后不同时间点猪胸腺组织切片中凋亡相关调节基因Bid、Bcl-xl表达水平,结果显示一段时间内Bid基因转录水平上调、Bcl-xl基因转录水平下调,与同条件下荧光定量PCR结果一致.综上,本研究建立的RNAscope(R) ISH-IHC双重染色技术结合了RNAscope(R) ISH与IHC各自的优势,不仅能够检测病毒感染后在组织中的定位,还可以分析病毒感染后宿主内源性基因转录的变化趋势,实现了在同一组织切片中对核酸与蛋白的双重检测.经验证该检测方法适用于PRRSV实验室研究,为PRRSV的相关基础研究提供新的检测手段.

关键词：RNAscope(R) 原位杂交、免疫组织化学、细胞凋亡、猪繁殖与呼吸综合征病毒

所属期刊栏目：41

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：中国农业科学院2017年院所长基金-病理学创新性研究平台建设1610302017015

在线出版日期：2019-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：40-45