猪伪狂犬病病毒直接免疫荧光检测方法的建立及初步应用

摘要：

为建立一种快速、敏感、准确的猪伪狂犬病病毒(PRV)直接免疫荧光检测方法(DFM),本研究通过制备并纯化PRV gE蛋白单克隆抗体(MAb),将其标记异硫氰酸荧光素(FITC)后对荧光抗体的最佳工作条件进行摸索;并对荧光抗体的特异性、敏感性、重复性和稳定性进行测定;应用DFM对从临床收集的83份疑似病料进行检测,同时用PCR检测作为对照,计算符合率.结果显示,本研究制备FITC标记抗体的F/P比值为2.578±0.012,符合标准;荧光抗体的最佳工作条件为:使用固定剂(60％丙酮+40％乙醇)于-20℃固定20 min,抗体工作浓度为15μg/mL,抗体孵育时间为1h;荧光抗体能在107病毒稀释度(1×TCID50)检出阳性信号,与PCV2、PPV、PRRSV、CSFV、PRV Bartha-K61均无交叉反应;批内和批间重复性良好,-20℃保存5个月染色后荧光强度仍稳定;83份临床样品检测结果显示,DFM与PCR的符合率为74.7％,其中淋巴结和扁桃体的符合率较高,分别为85.7％和93.3％.本研究建立的PRV直接免疫荧光检测方法为临床PRV检测和复合诊断奠定基础,适用于临床推广.

关键词：猪伪狂犬病病毒、单克隆抗体、荧光抗体、直接免疫荧光检测方法

所属期刊栏目：39

分类号：S852.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技支撑计划2015BAD12B04

在线出版日期：2018-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：993-997