鸭坦布苏病毒一步法RT-PCR与荧光定量RT-PCR检测方法的建立

摘要：

为建立鸭坦布苏病毒(DTMUV)的检测方法,本研究根据GenBank中登录的DTMUV E基因保守区域设计引物和探针,建立了检测DTMUV的一步法RT-PCR和荧光定量RT-PCR方法,并比较了两种方法的敏感性和特异性.结果显示,荧光定量RT-PCR标准曲线的相关系数(R2)为0.999,DTMUV RNA在102拷贝/μL ～107拷贝/μL范围内与Ct值呈现良好的线性关系;两种方法均仅对DTMUV RNA具有特异性扩增,而对其他常见鸭病原核酸的扩增均为阴性,具有较强的特异性;一步法RT-PCR对鸭胚纯培养病毒RNA的检测下限为103拷贝/μL,而荧光定量RT-PCR的检测下限为102拷贝/μL;重复性试验的变异系数均小于1.5％.对20份模拟临床样品的检测结果表明,一步法RT-PCR的阳性率为75 ％(15/20),而荧光定量RT-PCR的阳性率为90％(18/20).本研究表明所建立的DTMUV荧光定量RT-PCR特异性强、重复性好、敏感性更高,更适用于DTMUV的临床诊断和流行病学调查.

关键词：鸭坦布苏病毒、荧光定量RT-PCR、一步法RT-PCR、E基因

所属期刊栏目：38

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：质检总局科研项目2015IK093

在线出版日期：2016-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：629-633