抗鸡传染性法氏囊病病毒单链抗体库的构建及其中和抗体的筛选

摘要：

为构建抗鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的细菌展示单链抗体(scFv)库并筛选出具有高亲和力和中和活性的scFv.本研究从IBDV免疫鸡的法氏囊提取总RNA,采用RT-PCR的方法分别扩增鸡抗体的VH和VL编码序列,插入含有(Gly4Ser)3 linker的pTlinker载体中,再将VH-linker-VL片段亚克隆到细菌展示载体pBSD中.以FITC标记的VP2蛋白为诱饵,通过流式细胞术筛选出5株阳性scFv,其氨基酸同源性为82.16 ％～87.27％.将5株scFv基因分别插入原核表达载体pET-27b(+)中,构建重组表达质粒pET-IBDV-scFv.将其转化大肠杆菌Rosetta进行诱导和表达,该5株scFv相对分子质量均约为28 ku.此外,利用纯化的scFv包被于ELISA检测板中作为扑捉抗体,检测结果显示scFv对VP2蛋白和不同IBDV株均具有特异性结合能力.而且通过体外中和试验结果表明,仅有一株scFv具有病毒中和活性,可以有效阻断IBDV(B87株)对鸡胚成纤维细胞(DFl)的感染.该研究结果为进一步研制IBDV治疗性抗体奠定了基础.

关键词：IBDV、细菌展示、单链抗体、中和活性

所属期刊栏目：36

分类号：S852.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目31001084;黑龙江省博士后科研启动基金项目LBH-Q09162

在线出版日期：2014-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：227-231