禽网状内皮组织增殖病病毒PCR及RT-PCR检测方法的研究和p30主要抗原域的原核表达

摘要：

根据MONA M.ALY发表的一对引物,5'-CATACTGGAGCCAATGGTGTAAA GGGCAG A-3'(上游引物),5'-AATGTTGTAGCGAAGTACT-3'(下游引物),上游引物位于REV-SNV毒株LTR序列上游237 bp到267 bp,下游引物在499 bp到517 bp之间,扩增产物总长为281 bp.以REV-T株感染的鸡胚成纤维细胞DNA作为PCR扩增模板,进行PCR扩增,提取病毒RNA进行RT-PCR,这两种方法均获得了禽网状内皮增生症T株的部分LTR序列,将其克隆入pGEM-T Easy克隆载体中,经测序,证实为禽网状内皮增生症T株的部分LTR序列,初步建立了REV的PCR和RT-PCR检测方法.人工合成了REV p30的主要抗原域,用构建成功的表达禽网状内皮增生症p30主要抗原域的原核表达载体pET-p30,转化大肠杆菌BL21,挑取阳性克隆培养,IPTG诱导后裂解菌体作SDS-PAGE分析,出现大小约25 Ku的表达产物即融合蛋白TrxA-p30主要抗原域,经Western blot验证融合蛋白具有REV特异的反应原性.采用常规表达条件:LB培养基,37℃培养,待菌生长至OD600为0.4 h～0.6 h,用终浓度为0.2 mmol/L～0.8 mmol/L的IPTG进行诱导,于37℃振荡培养4 h～5 h,均能高效表达.本研究为建立REV抗体的ELISA检测方法打下基础.

关键词：禽网状内皮增生症病毒、p30蛋白主要抗原域、原核表达系统、Western blot

所属期刊栏目：28

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

在线出版日期：2006-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：441-445