骨形态发生蛋白9基因修饰人羊膜间充质干细胞体外向韧带成纤维细胞分化研究
目的:探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)基因修饰对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)在体外向韧带成纤维细胞(LFs)分化是否有促进作用,并研究其分子机制.方法:体外分离培养hAMSCs及LFs,观察并比较两种细胞形态学差异.经AdMAX系统体外构建BMP9基因腺病毒载体,经提纯及荧光法病毒滴度测定后转染P3代hAMSCs.实验分为三组,A组:携带绿色荧光蛋白(GFP)的空腺病毒载体转染hAMSCs(hAMSCs-GFP);B组:携带BMP9基因的腺病毒载体转染hAMSCs (hAMSCs-BMP9);C组:韧带成纤维细胞组(LFs).于体外分别培养7天后使用荧光定量PCR检测并比较各组韧带相关基因Scleraxis (Scx)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、细胞连接素(TNC)、纤维连接蛋白(Fib)及腱调蛋白(Tnmd)mRNA的表达量.使用免疫荧光检测并比较三组细胞体外培养7天后Col Ⅰ的表达量.结果:在倒置相差显微镜下,hAMSCs原代呈多角形贴壁生长,传代后呈长梭状漩涡状生长.LFs原代呈长梭状贴壁生长,传代后呈漩涡状集落样生长.A、B组细胞转染8h、24 h后,生长增殖缓慢,轮廓清晰,细胞形态未发生变化.荧光显微镜观察显示A组在转染8h后可见GFP荧光表达,24 h后表达荧光的数量和强度均增多.实时荧光定量PCR显示,转染7天时B组SCX、Tnmd、Col Ⅰ、Fib及TNC的表达量均高于A组(P＜0.05),而SCX、Fib、TNC及Tnmd的表达量低于C组(P＜0.05),Col Ⅰ的表达量高于C组(P＜0.05).荧光免疫组化显示,转染7天后,B组Col Ⅰ的表达量均高于A组和C组.结论:BMP9基因可促进hAMSCs向LFs定向分化,并促进韧带特异性基因的表达和细胞外基质的产生,为hAMSCs作为韧带组织工程种子细胞提供了实验基础.
人羊膜间充质干细胞、BMP9、细胞分化、基因工程、韧带组织工程
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贵州省科技厅联合基金黔省专合字2012172号;贵州省科技厅联合基金[黔科合LH字20167477号;黔科合支撑20172882号]
2018-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
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