尼古丁对大鼠髌腱肌腱干细胞生物学特性影响的实验研究
目的:探讨体外尼古丁对大鼠髌腱肌腱干细胞(tendon-derived stem cells,TDSCs)的细胞活力、细胞早期凋亡以及肌腱相关基因表达的影响,揭示吸烟导致肌腱病变以及损伤肌腱延迟愈合的潜在细胞学发病机制.方法:无菌条件下取8周龄SD大鼠的髌腱,Ⅰ型胶原酶消化分离获得单个有核细胞,以最适密度(50个/cm2)进行接种,细胞呈克隆样生长,获得原代TDSCs.基础培养细胞至第3代,将其分为两组,实验组用不同浓度的尼古丁培养基(10-7 M,10-6 M,10-5 M,10-4 M和10-2 M)干预,对照组继续采用基础培养基(0M)培养.处理6h、24 h、48 h和72 h后分别应用四唑盐(MTT)比色法检测尼古丁对TDSCs体外存活的影响,72h后应用Annexin V-FITC/PI双染法检测尼古丁对TDSCs体外早期凋亡的影响,实时荧光定量PCR(Realtime PCR)检测肌腱相关基因Col1a1和Scx的表达.结果:与对照组相比,实验组不同浓度的尼古丁干预下,TDSCs的细胞活力呈下降趋势,呈时间依赖性和浓度依赖性,浓度高于10-4M时作用显著,差异具有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪检测TDSCs早期凋亡(Annexin V+/PI-)的数量随着尼古丁浓度的增加而增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).同时,Realtime PCR检测结果显示:与对照组相比,实验组中Col1a1和Scx的mRNA表达水平均降低,浓度高于10-5 M时作用显著,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:体外尼古丁可抑制大鼠髌腱TDSCs的细胞活力,导致TDSCs早期凋亡,同时抑制TDSCs中成肌腱分化转录、细胞外基质合成相关基因的表达.这可能是吸烟导致肌腱病变以及损伤肌腱延迟愈合的潜在细胞学发病机制.
尼古丁、肌腱干细胞、肌腱病变、延迟愈合、成肌腱分化
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R68;R6
国家自然科学基金青年基金项目81201422;江苏省自然科学基金青年基金项目BK2012334;东南大学基本科研业务费“创新基金”项目3290002401;国家大学生创新训练计划1210286090;中国博士后基金资助2012M520983;江苏省“六大人才高峰”资助项目2013-WSW-054
2016-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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