ShRNA介导的Smad4基因沉默对C2C12成肌细胞纤维化的影响

摘要：

目的:研究慢病毒介导的Smad4-shRNA对TGF-β1诱导的纤维化进程的影响.方法:(1)设计并选择抑制效能最高的Smad4-shRNA,包装生产慢病毒,转染C2C12成肌细胞,并检测转染后细胞的Smad4表达；(2)根据TGF-β1诱导C2C12成肌细胞向成肌纤维细胞分化的模型,以慢病毒介导的Smad4-shRNA转染细胞,将不同处理的细胞分为A、B、C、D四组,分别为C2C12细胞组、TGF-β1诱导组、C2C12细胞转染组和TGF-β1诱导后转染组.通过荧光Realtime-PCR和Westerblot检测各组collagen Ⅰ和α-SMA表达水平.结果:(1)慢病毒介导Smad4-shRNA1转染C2C12细胞后,其Smad4 mRNA和蛋白表达显著低于未转染组(P＜0.05)；(2) TGF-β1诱导组α-SMA和Collagen Ⅰ mRNA及蛋白表达均显著高于C2C12细胞组(P＜0.05);(3) TGF-β1诱导后转染组α-SMA与collagen Ⅰ mRNA及蛋白表达显著低于TGF-β1诱导组(P＜0.05),与C2C12细胞组和C2C12细胞转染组相比则无明显差异(P＞0.05).结论:降低Smad4表达能有效抑制成肌细胞及受TGF-β1诱导成肌纤维细胞的纤维化过程,提示Smad4可能成为拮抗骨骼肌纤维化的靶点.

关键词：骨骼肌损伤、纤维化、Smad4、TGF-β1、C2C12成肌细胞

所属期刊栏目：30

分类号：R68;S85

资助基金：国家自然科学基金项目NSFC 30800543

在线出版日期：2013-01-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1100-1105