多重实时荧光定量PCR分析转基因烟草外源基因拷贝数

摘要：

[目的]采用多重实时荧光定量PCR方法在一个反应内同时检测转基因烟草中插入外源基因35S、NOS、NPT Ⅱ的拷贝数.[方法]将转基因阳性参照烟草基因组DNA经梯度稀释,通过多重荧光定量PCR反应同时获得烟草内源参照基因NR、外源基因35S、NOS、NPT Ⅱ的相关性标准曲线方程,将待测株系外源基因的Ct值代入标准曲线方程后估算其拷贝数.[结果]获得了上述4个基因的标准曲线,其R2均接近于1,相关性较高.在检测的六个转基因株系中初筛到3株3个外源基因均为单拷贝的株系.[结论]可使用该方法对转基因烟草外源基因插入拷贝数进行估算,为获得稳定遗传材料提供初筛依据.

关键词：转基因烟草、多重实时荧光定量PCR、外源基因、拷贝数

所属期刊栏目：23

分类号：S57;S48

资助基金：中国烟草总公司贵州省公司科技项目201604;贵州省科技支撑计划农业攻关科技计划项目黔科合NY[2013]3020号;贵州省科学技术基金黔科合J字[2014]2117号

在线出版日期：2017-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：92-97