朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP快速检测体系的建立

摘要：

为快速检测朱顶红褪绿环斑病毒(hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV),根据HCRV的核壳体(N)蛋白基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对RT-LAMP体系反应温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度、内外引物浓度比等进行逐一优化,建立了HCRV逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系.结果表明,最佳引物组为P1,最适反应温度为64℃,Betaine、dNTPs、Mg2+的最佳终浓度分别为0.8、0.2、6 mmol/L,最佳内外引物浓度比为5:1,最佳反应时间50 min.检测结果显示优化后的RT-LAMP经SYBR Green I染色可通过肉眼直接判断结果,具有高度特异性,且灵敏度是常规RT-PCR的100倍.本研究为HCRV的检测提供了一种便捷、高效、可靠的方法.

关键词：朱顶红褪绿环斑病毒、RT-LAMP、特异性、灵敏度

所属期刊栏目：44

分类号：S435.72(病虫害及其防治)

资助基金：国家自然科学基金;云南省烟草公司科技计划项目;云南省科技厅基础研究专项;云南省教育厅科学研究基金项目

在线出版日期：2023-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：39-46