烟草TILLING技术体系的建立及NtPhyB基因的筛选

摘要：

定向诱导基因组局部突变技术（Targeting Induced Local Lesions In Genomes，TILLING）是一种新近发展起来的高通量检测点突变的反向遗传学方法。本研究首次将TILLING技术用于EMS处理的烟草突变体筛选中，通过对正反向荧光引物使用量的摸索，确定了10μL PCR体系中IRDye-700标记的正向引物（1μM）适用量为0.32～0.64μL，IRDye-800标记的反向引物（1μM）适用量1.12～1.6μL；对异源双链CELⅠ酶切体系实验表明，10μL PCR产物中加入0.6μL CEL I酶，1.5μL 10× Buffer酶切效果最好。从而建立并优化了适用于普通烟草基因组研究的TILLING技术体系。在此基础上，以NtPhyB为目标基因，在1000份0.6% EMS诱变的M2突变体中进行筛选，共得到13个突变体，该基因突变频率约为1/94 kb。本试验建立的TILLING筛选体系能够快速、高效地筛选任意已知序列基因的突变体，对烟草功能基因组研究具有重要意义。

关键词：功能基因组学、TILLING、烟草、化学诱变、突变体

分类号：S572

资助基金：中国烟草总公司烟草基因组计划重大专项项目“烟草突变体库创制、筛选与分析”[110201101009JY-03]；“烟草突变体筛选与鉴定”[110201201004JY-04]；“烟草突变体库创建与功能基因组学研究”110200701022

在线出版日期：2014-05-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：32-36