新型CRM1靶向抑制剂的筛选及其对结外NK/T细胞淋巴瘤细胞增殖的作用

摘要：

利用计算机辅助药物设计,筛选新型染色体区域维持因子(CRM1)共价靶向抑制剂,并探究其对结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKTL)细胞增殖的影响.利用基于片段的药物设计方法在LFS-01母核结构的基础上设计新型CRM1抑制剂并利用ADME/T、共价对接等手段进行药物筛选得到小分子化合物LFS-829.MALDI-TOF质谱分析表明,LFS-829对CRM1具有靶向作用.用CCK-8法检测LFS-829对ENKTL细胞系SNK6及HANK-1增殖活性的影响,活细胞工作站观察药物作用下细胞形态的变化.利用免疫荧光技术分析LFS-829对CRM1核输出功能的影响.通过蛋白质免疫印迹实验、双荧光素酶报告基因实验以及酶联免疫吸附技术分析不同浓度的LFS-829作用下NF-κB信号通路的变化.借助流式细胞仪分析检测细胞凋亡,并通过蛋白质免疫印迹实验检测凋亡通路相关蛋白的表达.根据外周血单核淋巴细胞(PBMC)毒性测试、血小板毒性测试以及小鼠急性毒性实验对LFS-829进行安全性评价.结果表明,LFS-829能够与CRM1蛋白疏水活性口袋的半胱氨酸残基共价靶向结合,并选择性杀伤SNK6及HANK-1细胞,72 h的IC50分别为366和158 nmol/L.800 nmol/L LFS-829能够显著抑制CRM1的细胞核输出功能,促使IκB-α的细胞核聚集,下调NF-κB信号通路的转录活性,并显著上调凋亡通路蛋白p53、剪切型Caspase 3和剪切型Caspase 9的表达,诱导细胞凋亡.LFS-829对PBMC以及血小板没有明显的杀伤效果.在300 mg/kg的大剂量作用下,LFS-829未对小鼠造成实质性的组织损伤,安全性良好,具有良好的应用前景.

关键词：染色体区域维持因子1、抑制剂、计算机辅助药物设计、结外NK/T细胞淋巴瘤、细胞核输出、细胞增殖、细胞凋亡

所属期刊栏目：51

分类号：R965(药理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目No.81874301

在线出版日期：2020-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：44-51