双重荧光实时RT-PCR技术鉴定H9N2亚型禽流感病毒

摘要：

采用双重荧光实时RT-PCR技术,建立一种简便易行的HgN2亚型禽流感病毒的快速鉴定方法.通过比对GenBank甲型禽流感病毒H9N2亚型的HA和NA基因序列,设计特异性针对HA和NA的引物,分别选用FAM和JOE两种不同荧光标记探针,构建双重实时荧光PCR一步法反应体系,同时检测样本中的HA和NA基因.结果显示:扩增曲线和特异性实验结果显示,该体系具有很好的扩增效率,且仅特异性识别H9N2亚型AIV的HA、NA基因,与相关病毒或其他亚型无交叉反应.采用重组质粒pMD19-T构建HA、NA阳性质粒,10倍梯度稀释液为模板,进行荧光定量PCR.结果证实,本研究所建立的双重荧光定量RT-PCR体系敏感性能达到10个RNA拷贝数.采用本方法检测60份感染动物样品及60份环境样品,与传统PCR方法相比,检测敏感性提高了100倍;与病毒分离鉴定方法比较,二者的鉴定结果完全吻合.该方法具有特异性强、灵敏度高、快速易操作等优点,是H9N2亚型禽流感病毒鉴定的有效方法.

关键词：禽流感病毒、H9N2、双重荧光实时RT-PCR技术

所属期刊栏目：45

分类号：S854(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81301448,81301448,3120040;江苏省疾病预防控制中心重点人才资助项目JKRC20110029;the National Natural Science Foundation of China3120040,81301448;the Key Medical Talent Foundation of Jiangsu Provincial Center for Disease Prevention and ControlJKRC20110029

在线出版日期：2015-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：486-490