重组人血清白蛋白第3结构域-Nartograstim融合蛋白在毕赤酵母中的表达及初步活性研究

摘要：

将人血清白蛋白第3结构域(3DHSA)与粒细胞集落刺激因子突变体(Nartograstim)融合基因克隆至载体pPICzαA,置于醇氧化酶启动子(AOX)和α交配因子信号肽作用下构建分泌表达质粒,电击转化入毕赤酵母GS115.SDS-PAGE结果显示3DHSA-Nartograstim相对分子质量约为42 kD,Western blot证实其同时具有HSA和G-CSF的抗原性.建立融合蛋白表达的条件为:BMMY培养基pH6.0、1.5％甲醇、诱导84 h,灰度扫描发现该条件下融合蛋白的纯度为79％.依次采用亲和色谱和疏水色谱纯化得到纯度高于90％的融合蛋白,终产量为86 mg/L.采用MTT法检测融合蛋白对NFS-60细胞株的促增殖能力,结果显示,3DHSA-Nartograstim具有剂量依赖性促进NFS-60细胞增殖的作用.本研究为3DHSA-Nartograstim的进一步研究奠定了基础.

关键词：人血清白蛋白、粒细胞集落刺激因子、3DHSA、毕赤酵母

所属期刊栏目：44

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：江苏省“青蓝工程”资助项目2010;This study was supported by the "Qing-Lan" Project of Jiangsu Province2010

在线出版日期：2015-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：577-582