可诱导高拷贝的正交琥珀抑制性tRNA筛选质粒的构建

摘要：

为筛选获得对大肠杆菌氨酰合成酶具有高度正交性的琥珀抑制tRNA,建立了一种基于可诱导高拷贝质粒的筛选系统.利用乳糖操纵子对oriL复制子进行调控,有IPTG存在时使其携带的琥珀抑制性tRNA大量转录.正交性不高的琥珀抑制性tRNA大量转录时导致宿主菌死亡,只有携带高正交性的琥珀抑制性tRNA的克隆可以存活,从而达到筛选目的.利用这一筛选质粒,构建了琥珀抑制性tRNA突变文库,并进行了筛选,获得了与大肠杆菌氨酰tRNA合成酶具有高度正交性的突变体,并利用含琥珀抑制突变的半乳糖苷酶突变体进行了验证,证实利用可诱导高拷贝的筛选质粒可筛选出高正交性的琥珀抑制性tRNA突变体.

关键词：可诱导高拷贝质粒、琥珀抑制性tRNA、遗传密码扩充技术

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分类号：Q933(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31200694;中央高校基本科研业务费专项资金资助项目JKQ2011043;国家基础科学人才培养基金资助项目J0630858

在线出版日期：2015-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：174-178