假单胞菌海因酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要：

目的：构建海因酶基因工程菌，以便实现对羟基苯甘氨酸的工业化生产。方法：利用PCR技术从恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida） 9801中扩增得到海因酶基因，将该基因插入pMD18-T质粒，转化大肠杆菌（Escherichia coli），通过地高辛标记原位杂交和海因酶活力测定两种方法，筛选出具有海因酶活力的阳性转化子。结果：工程菌E.coli BL21/pMD-dht的海因酶活力达到1700 U/L，比野生菌恶臭假单胞9801菌的酶活力提高8倍。SDS-PAGE显示海因酶的单体分子量约为53 KDa，海因酶的表达量约占菌体总可溶性蛋白的20%。结论：构建的海因酶基因工程菌已初步具有工业化应用价值。

关键词：海因酶、恶臭假单胞菌、基因克隆、基因表达

所属期刊栏目：32

分类号：Q785;Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：江苏省应用基础研究计划项目BJ97080

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：227-230