猴血浆中抗腺相关病毒8中和抗体滴度检测方法的建立及初步确认

摘要：

目的:建立一种基于细胞平台的高灵敏度、高效、稳定的猴血浆中抗腺相关病毒 8(AAV8)中和抗体滴度的检测方法,并对该方法进行相关性能的初步确认.方法:在体外将等体积稀释后的猴血浆与AAV8-Luciferase孵育后,取混合液加入铺有HEK293 细胞的96 孔板中,孵育过夜以感染HEK293 细胞;细胞裂解后加入萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂,使用酶标仪检测荧光信号(RLU),以评估血浆中抗AAV8 中和抗体含量,继而得到相应的抗体滴度.该研究对检测方法的检测灵敏度(LOD)及滴度实验重复性、精密度、方法稳健性和样品稳定性等性能进行初步确认.结果:建立了高灵敏度、高效、稳定的细胞水平检测猴血浆中抗AAV8 中和抗体滴度的方法并完成初步确认.该方法LOD值为10.36 ng·mL-1,滴度实验重复性、精密度及方法稳健性良好,阳性对照样品室温放置24h、2℃～8℃放置24h、经-65℃～-90℃/室温冻融6次均保持稳定.结论:经初步确认,该方法可以用于猴血浆中抗AAV8 中和抗体滴度的分析检测,利于掌握药物治疗进程,及时调整治疗方案,对AAV8 血清型基因治疗药物的研发及个体化治疗有一定提示作用.

关键词：VGB-R04、中和抗体、细胞水平、方法学、验证

所属期刊栏目：32

分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：上海市科委工程技术研究中心专项基金资助项目17DZ2252900

在线出版日期：2023-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1622-1628