10.3969/j.issn.1003-3734.2022.21.007
靶向人Claudin18.2单克隆抗体的制备与鉴定
目的:制备特异性结合人紧密连接蛋白18.2(Claudins18.2,CLDN18.2)单克隆抗体.方法:采用编码人CLDN18.2的质粒DNA和高表达人CLDN18.2重组细胞系免疫小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体,并对其进行活性鉴定.通过Cell-based ELISA方法进行杂交瘤筛选获得特异性抗体,并构建嵌合抗体对其与高表达重组细胞系和低表达CLDN18.2的NUGC4细胞结合活性进行评价;采用报告基因法对嵌合抗体的抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)活性进行检测;采用CCK8法对嵌合抗体的补体依赖的细胞毒性作用(complement dependent cytotoxicity,CDC)活性和增殖抑制活性进行检测.结果:共筛选出4株特异性结合人CLDN18.2的杂交瘤细胞株,分别命名为mab429,mab623,mab624,mab782,并对其进行亚型测定;成功获得4株抗体可变区序列,并构建嵌合抗体;嵌合抗体均与人CLDN18.2特异性结合,其中嵌合抗体ch782与NUGC4细胞结合活性优于参照抗体.ch782能诱导对靶细胞的ADCC活性和CDC活性,且ch782对NUGC4细胞的ADCC活性强于参照抗体;ch782对靶细胞的增殖抑制效果优于参照抗体,并且具有一定的剂量依赖效应.结论:制备了高亲和力特异性结合CLDN18.2的单克隆抗体,并对其结合活性、ADCC活性、CDC活性、增殖抑制活性进行了评估.
CLDN18.2、胃癌、单克隆抗体、抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用
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R945(药剂学)
2022-11-24(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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