载siRNA的眼用三甲基壳聚糖修饰纳米粒的制备及其跨角膜作用评价

摘要：

目的:构建三甲基壳聚糖修饰非对称脂质双层PARP-1 siRNA基因递送系统(trimethyl chitosan modified nanoparticles with asymmetric lipid bilayers loading with poly ADP-ribose polymerase-1 siRNA,TMC-siNPs),并对其理化性质及其角膜透过能力进行评价.方法:采用qRT-PCR实验筛选最佳沉默效果的PARP-1 siRNA;采用兔眼部刺激性实验考察TMC安全性;采用钙磷沉淀-微乳法、薄膜分散法,并通过静电吸附制备TMC-siNPs;采用透射电子显微镜、粒度仪、琼脂糖凝胶电泳法对其形态、粒径、Zeta电位、包载能力进行测定;通过流式细胞仪考察人晶状体上皮细胞(HLECs)对TMC-siNPs的摄取能力;采用离体兔角膜透过实验结合激光共聚焦扫描显微镜成像考察TMC-siNPs的角膜透过能力.结果:确定最佳PARP-1 siRNA序列,并确定TMC最终浓度为0.1％.TMC-siNPs粒子形态呈球形且分散性良好;平均粒径为(57.3±0.6)nm,粒径分布良好;Zeta电位为(19.8±0.7)mV,显著高于TMC未修饰组,且琼脂糖凝胶电泳表明siRNA能稳定地包裹于纳米粒中.细胞摄取结果表明,相同时间下TMC-siNPs荧光强度明显强于Free-siRNA组,且随着时间增加,荧光逐渐增强.角膜透过性实验结果表明,与Free-siRNA组相比,siNPs和TMC-siNPs渗透至角膜深层的距离分别是Free-siRNA组的4和6倍,且主要通过细胞旁路通道途径发生角膜透过.结论:TMC修饰非对称脂质双层纳米粒可高效包载PARP-1 siRNA、促进基因角膜透过,有望提高基因药物的眼内疗效.

关键词：PARP-1 siRNA、三甲基壳聚糖、纳米粒、角膜透过

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分类号：R943(药剂学)

资助基金：国家自然科学基金;江西省教育厅科技项目;江西省教育厅科技项目;江西省青年井冈学者及人才计划;江西省百千万人才工程李翔,张婧;江西省自然科学基金;江西省自然科学基金;江西省自然科学基金;江西省大学生创新创业训练计划项目

在线出版日期：2022-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1315-1321