以PDE2为靶标的抑制剂药物高通量筛选模型的建立

摘要：

目的:建立稳定可靠,且以二型磷酸二酯酶(PDE2)为靶标,采用AlphaScreen(R) cAMP kit为技术的高通量药物筛选模型.方法:利用大肠杆菌原核表达纯化获得目的蛋白,通过AlphaScreen酶活体系摸索MgCl2浓度对PDE2活性影响,测定底物Bio-cAMP的Km值,考察二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对体系的影响,最后测定阳性抑制剂Bay 60-7550的半抑制浓度(IC50)验证模型.结果:纯化的PDE2蛋白通过SDS-PAGE检测分子量约为40.0 kD,测得浓度1.2 mg·mL-1;反应缓冲液中MgCl2浓度定为10 mmol·L-1,结合米氏方程,测得Km后确定底物工作浓度为200 nmol·L-1,PDE2工作浓度为0.12 mg· mL-1;体系DMSO含量需低于4％;通过以上条件测得Bay 60-7550的IC50值为8.4 nmol· L-1,与文献值近似.结论:建立的高通量筛选模型,具备易于操作、信号窗口大、速度快、节省原料等特点,可用于PDE2抑制剂筛选.

关键词：二型磷酸二酯酶、AlphaScreen、抑制剂、高通量筛选

所属期刊栏目：29

分类号：R914(药物基础科学)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目;江苏省研究生科研与实践创新计划项目

在线出版日期：2020-08-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1175-1180