10.3969/j.issn.1003-3734.2020.01.007
食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度检测方法的开发及验证
目的:建立并验证检测食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度的酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)方法.方法:游离IgE和总IgE浓度的检测均采用夹心法.采用FcεRI作为捕获试剂,并采用生物素标记的抗IgE多抗作为检测试剂进行游离IgE浓度的测定;对于总IgE的检测,捕获和检测试剂均为抗IgE多抗.该研究对检测方法的关键参数进行了优化并对该方法进行定量范围、精密度、准确度、回收率、稳定性、方法特异性、药物干扰试验等方面的方法学验证.结果:游离IgE和总IgE的定量范围均在6.25 ~400 ng·mL-1,标准曲线样品复孔间变异(精密度,coefficient of variation,CV%)不超过20%,其中定量上限(upper limit of quantitation,ULOQ)和定量下限(lower limit of quantitation,LLOQ)不超过25%.相对偏差(relative deviation,RE%)不超过±20%,ULOQ和LLOQ不超过±25%.游离IgE检测方法的批内、批间精密度分别在0.87% ~9.15%和4.27%~6.50%;检测总IgE方法的批内、批间精密度分别在0.92%~11.60%和7.21% ~ 17.89%;游离IgE的回收率在76.53%~88.85%;总IgE的回收率分别在72.77% ~ 86.93%.干扰试验结果表明,奥马珠单抗不影响总IgE的回收率水平.然而在游离IgE检测中,奥马珠单抗浓度的升高可以显著降低游离IgE的回收率水平.结论:本研究建立的食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度的检测方法,可用于食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度测定,为抗IgE抗体的临床前评价提供重要的数据支持.
IgE、奥马珠单抗、酶联免疫吸附试验、方法学验证
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R99(毒物学(毒理学))
国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目;上海市科委工程技术研究中心;上海市扬帆计划项目
2020-04-10(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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