离子交换层析法制备高纯度人凝血因子Ⅷ的研究
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离子交换层析法制备高纯度人凝血因子Ⅷ的研究

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目的:从血浆冷沉淀中采用离子交换层析法纯化人凝血因子Ⅷ.方法:冰冻血浆在2~8℃环境下融化,离心法收获冷沉淀.用注射用水溶解冷沉淀,探索了5种冷沉淀溶解液预纯化的方法.冷沉淀溶解液经S/D病毒灭活后采用离子交换层析纯化人凝血因子Ⅷ,经超滤、配制、除菌分装、冻干、干热病毒灭活,获得人凝血因子Ⅷ成品,分别检测流穿液、洗涤液和洗脱液中人凝血因子Ⅷ效价和蛋白含量.观察了冻干和不同干热条件前后凝血因子Ⅷ活性的变化.观察人凝血因子Ⅷ冻干品的外观和复溶时间.结果:冷沉淀中人凝血因子Ⅷ的回收率为40% ~70%.5种冷沉淀溶解液预纯化方法中,用盐酸调节pH至6.6、6.3的方法人凝血因子Ⅷ回收率较高.离子交换层析流穿液中FⅧ损失率小于5%,而洗涤液中FⅧ损失率较高,最高损失率超过20%.人凝血因子Ⅷ中蛋白质含量较低,均小于0.65 mg·mL-1,比活性为50~100IU·mL-1.吐温-80和TNBP的残留量均符合《中国药典》的要求.冻干过程中人凝血因子Ⅷ效价下降大约1%~5%.100℃,30 min干热处理对FⅧ效价的破坏小于80℃,72 h.人凝血因子Ⅷ冻干品外观和复溶时间均达到中国药典标准.结论:采用离子交换层析法从血浆冷沉淀中分离出高纯度人凝血因子Ⅷ,可以进行工艺放大研究.

人凝血因子Ⅷ、离子交换层析、冷沉淀、血浆

24

R733.73(肿瘤学)

2015-05-21(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

760-764,799

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1001-7062

32-1199/R

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