Cdk5/p35抑制剂高通量筛选方法的建立及应用

摘要：

目的:建立适于高通量筛选的Cdk5/p35抑制剂筛选模型.方法:Cdk5/p35与其底物Histone H1反应时需消耗ATP,通过测定体系中ATP的剩余量,考察ATP浓度、酶浓度、底物浓度、反应温度、反应时间及体系pH等因素对酶促反应的影响,进而确定酶与底物反应的最佳条件,并采用Z'因子评价该模型的可靠性和可行性.应用已建立的Cdk5/p35抑制剂高通量筛选模型筛选和发现活性化合物.结果:反应体系的最佳反应条件为:ATP终浓度3μmol·L-1,Cdk5/p35终浓度30 nmol· L-1,Histone H1终浓度70 μmol·L-1,孵育温度37℃,孵育时间60 min,体系pH 7,Z'-因子为0.66.应用该模型对222个虚拟筛选挑选出的化合物进行筛选,发现了13个对Cdk5/p35抑制活性较好的化合物.结论:实验结果表明,该模型具有稳定、灵敏、高效等特点,可用于Cdk5/p35抑制剂的高通量筛选.该模型的建立,为Cdk5/p35抑制剂的发现以及Cdk5/p35调控AD的机制研究奠定基础.

关键词：阿尔茨海默病、Cdk5/p35抑制剂、tau蛋白磷酸化、高通量筛选

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分类号：R965.1(药理学)

资助基金：国家“重大新药创制”科技重大专项2014ZX09507003-002;国际合作项目2011DFR31240

在线出版日期：2014-05-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：781-786