流式细胞仪检测啮齿类外周血微核的方法学验证
目的:对流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测啮齿类外周血微核(micronucleus,MN)的方法进行GLP条件下的方法学验证,探讨FCM自动化微核检测方法在GLP条件下开展的可行性.方法:小鼠或大鼠分别灌胃给予去离子水或环磷酰胺(10和20 mg· kg-1),每日给药1次,连续给药3d.于末次给药后24 h先采集血样、再收集骨髓细胞.血样经固定后标记染色,采用FCM检测每只动物约20 000个网织红细胞(reticulocyte,RET),以评价外周血中RET的微核率(％MN-RET);骨髓细胞制片,于油镜下镜检,每只动物至少计数2 000个嗜多染红细胞(polychchromatic erythrocyte,PCE),以评价骨髓中PCE的微核率(％MN-PCE).此外,考察疟原虫生物标准品调校FCM的设置、阴性和阳性对照品检测范围、日内精密度、日间精密度、样品稳定性、与镜检方法的比较、检测RET的总数和携带作用等验证指标.结果:本实验中溶剂对照组的微核率在本实验室历史阴性对照数据范围内或文献报道阴性对照数据范围内,阳性对照组的微核率较溶剂对照组显著增加,且方法学验证可行,各项验证指标均如预期结果或满足接受准则.结论:FCM检测啮齿类外周血微核的方法可以代替常规显微镜检啮齿类骨髓微核的方法,用于GLP条件下的啮齿类微核实验.
流式细胞仪、微核、啮齿类、方法学验证
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R99(毒物学（毒理学）)
国家“重大新药创制”科技重大专项2012ZX09302002
2014-05-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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