重组甘氨酸脱羧酶基因工程菌生产L-5-甲基四氢叶酸

摘要：

目的:针对叶酸代谢通路中的甘氨酸脱氢酶(GDC)构建高效表达GDC的重组菌E.coli BL21(pET22b-gcvP)并检测L-5-甲基四氢叶酸(L-5-MTHF)的增加量.方法:采用PCR法获得GDC基因gcvP,分别在其两端加上HindⅢ和Xho Ⅰ酶切位点,经HindⅢ和Xho Ⅰ双酶切后,连接到经同样双酶切的表达载体pET22b中,经限制性内切酶酶切和测序验证正确后,转化至E.coli BL21中.乳糖诱导重组蛋白表达,进行SDS-PAGE电泳,HPLC检测L-5-MTHF产量.结果:经双酶切与测序鉴定证实原核重组载体pET22b-gcvP构建成功,表达产物相对分子质量约为104×103,与GDC大小相符.与原始菌相比,重组菌的L-5-MTHF的产量增加了23.1％.结论:重组甘氨酸脱羧酶基因工程菌能够提高L-5-MTHF产量.

关键词：L-5-甲基四氢叶酸、甘氨酸脱羧酶、克隆、原核表达、双酶切

所属期刊栏目：22

分类号：R977.22(药品)

资助基金：中央高校基本科研业务费专项资金JKQ2011046

在线出版日期：2013-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2379-2382,2409