SYBR-Green实时定量PCR用于Vero宿主细胞DNA残留量的检测
目的:建立基于SYBR-Green荧光染料实时定量PCR检测Vero宿主细胞DNA残留量的方法.方法:提取Vero细胞基因组DNA,设计细胞基因组高度重复顺序AGMr( HindⅢ)-1基因片段的特异性引物,通过PCR扩增AGMr( HindⅢ)-1序列中一段特异性cDNA片段,克隆至pGEM-T Vector,重组质粒经酶切及测序鉴定合格后命名为pGEM-T/AGMr( Hind Ⅲ)-1-S.结果:使用重组质粒和细胞基因组DNA分别作为检测标准品,均取得了良好的结果,其检测灵敏度分别达到了0.03 fg·μL-1和0.03 pg· μL-1.结论:SYBR-Green实时定量PCR可用于Vero宿主细胞DNA残留量的准确定量.
实时定量、Vero细胞、细胞基因组DNA、重组质粒、残余DNA
21
R186(流行病学与防疫)
国家科技支撑计划2008BAI66B08
2012-07-23(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
1152-1156