酪氨酸蛋白激酶配体EphrinB2蛋白靶向miRNA表达载体构建及其沉默效率评价

摘要：

目的:针对大鼠的Efnb2基因序列(目的蛋白EphrinB2),构建特异性干扰微小RNA(miRNA)及其表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR,并检测其对Efnb2基因的干扰作用.方法:根据NM001107328基因序列设计并合成4对miRNA oligo;将4对oligo退火成双链.然后用载体构建试剂盒进行重组克隆,将4对双链miRNA oligo分别插入到miRNA表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR中,构建4个miRNA表达质粒,通过脂质体2000将已经构建好的pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR干扰质粒转染至大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞中,通过qPCR检测Efnb2基因表达水平的变化.结果:DNA测序分析证明Efnb2基因的miRNA载体构建正确,RT-PCR结果表明Efnb2基因的表达水平明显降低.结论:成功地构建了针对Efnb2基因的miRNA载体,转染细胞后对Efnb2基因沉默.

关键词：微小RNA、RNA干扰、基因治疗、酪氨酸蛋白激酶配体、EphrinB2、大鼠嗜铬细胞瘤细胞株PC12

所属期刊栏目：19

分类号：R915.2(药物基础科学)

在线出版日期：2010-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1184-1188