实时定量PCR技术研究DNA疫苗在小鼠体内的生物分布

摘要：

目的:建立并确证实时定量PCR(RT-PCR)定量检测生物基质中质粒DNA的方法,并应用于治疗性核酸疫苗HIV-PV的体内生物分布研究.方法:建立SYBR Green荧光定量PCR绝对定量方法(Q-PCR),考察方法的特异性、灵敏度、精密度、准确度以及生物基质对PCR的抑制效应.小鼠尾静脉注射裸质粒DNA、小鼠尾静脉注射和灌胃2种途径免疫HIV-PV DNA疫苗,考察建立的Q-PCR方法对于不同形式的质粒DNA疫苗以及不同免疫方式的适用性.结果:Q-PCR方法可特异检测目标DNA,定量检测范围为10～107拷贝/100 ng基因组DNA(gDNA),定量下限(LLOQ)为10拷贝/100 ng gDNA.批内和批间精密度分别<11%和8%;由高至低4种浓度(107,104,100,10拷贝/100 ng gDNA)QC样品准确度分别为(1.57±0.02)%,(1.60±0.01)%,(2.20±0.02)%和(2.28±0.02)%.用Q-PCR方法成功得到不同形式DNA疫苗和不同免疫途径(尾静脉注射和灌胃HIV-PV疫苗)下该质粒DNA的生物分布模式.结论:利用RT-PCR技术,建立了符合DNA疫苗生物分布研究要求的定量检测生物基质中质粒DNA的方法学,并成功应用于不同质粒DNA疫苗形式和不同免疫途径下的DNA疫苗的生物分布研究.

关键词：DNA疫苗、实时定量PCR、生物基质、绝对定量、生物分布

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分类号：R915(药物基础科学)

资助基金：国家自然科学基金30500625

在线出版日期：2009-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：728-732,766