10.14109/j.cnki.xyylc.2016.05.011
重组人促红素对高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响
目的 研究重组人促红素(EPO)对高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响,以及内质网应激(ERS)在其中的作用.方法 分离新生SD大鼠心肌细胞,培养72 h后用高糖诱导心肌细胞凋亡,以甘露醇作为高渗对照,并用不同浓度EPO(5、10、20、40 U· mL-1)预处理心肌细胞48 h,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,选取EPO最佳干预浓度;将实验分成五组即正常糖(NG)组、EPO+NG组、高糖(HG)组、EPO+HG组和ERS抑制剂4-苯基丁酸(PBA)+HG组,流式细胞仪测各组凋亡率,激光共聚焦显微镜检测各组钙离子的平均荧光强度,Real-time PCR和Western blot分别检测各组促红素受体(EPOR)、ERS标志物GRP78、钙内流蛋白Serca2a的mRNA和蛋白表达.结果 高糖诱导后心肌细胞凋亡率(41.36±10.49)%,显著高于正常心肌细胞凋亡率(16.08±3.97)%(P<0.05),甘露醇组对正常心肌细胞凋亡无显著影响(P>0.05);20 U·mL-1 EPO预处理高糖诱导的心肌细胞后凋亡率为(20.97±10.55)%,为最佳干预浓度.与NG组比较,EPO+NG组各指标均无显著差异(P>0.05),HG组凋亡率和钙离子荧光强度显著增加,EPOR、Serca2a的mRNA及蛋白表达降低,GRP78 mRNA及蛋白表达升高(均P< 0.05);与HG组相比,PBA+HG组和EPO+HG组凋亡率和钙离子荧光强度降低,EPOR、Serca2a的mRNA及蛋白表达升高,GRP78 mRNA及蛋白表达降低(均P<0.05);PBA+HG组和EPO+HG组各指标均无显著差异(P>0.05).结论 高糖可通过介导ERS并引发钙稳态失衡诱导心肌细胞凋亡;EPO能够抑制高糖诱导心肌细胞的凋亡,该作用可能与抑制ERS,增强钙内流蛋白表达、维持细胞内钙离子平衡有关.
红细胞生成素、肌细胞、心脏、内质网应激、凋亡
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R972(药品)
国家自然科学基金81300249
2016-07-07(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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