阴道毛滴虫巨噬细胞迁移抑制因子对THP-1巨噬细胞的作用

摘要：

目的 探讨阴道毛滴虫分泌的巨噬细胞迁移抑制因子(TvMIF)对THP-1巨噬细胞的作用.方法 原核表达重组TvMIF蛋白并纯化,鉴定后去内毒素.采用不同浓度(0、1、5、10、50 ng/mL和100 ng/mL)重组TvMIF蛋白作用于THP-1巨噬细胞,用细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK)-8检测重组TvMIF蛋白对THP-1巨噬细胞的毒性,采用流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,采用实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR)检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NL-RP3)、caspase-1、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-18 mRNA表达水平变化,采用Western blotting技术检测THP-1巨噬细胞中caspase1、NLRP3、消化道皮肤素D(gasdermin D,GSDMD)及GSDMD蛋白氨基端裂解片段(gasdermin D N-ter-minal,GSDMD-NT)、pro-IL-1β蛋白表达水平变化.结果 成功表达并纯化获得分子量为15.5 kDa的重组TvMIF蛋白.内毒素检测结果显示,已去除重组TvMIF蛋白的内毒素(浓度<0.1 EU/mL),可用于蛋白功能研究.流式细胞术检测结果显示,当重组TvMIF蛋白浓度≤10 ng/mL时可促进THP-1巨噬细胞凋亡,当TvMIF浓度为5 ng/mL时凋亡现象最为明显,当重组TvMIF蛋白浓度为50、100 ng/mL时可抑制THP-1巨噬细胞凋亡.当TvMIF蛋白浓度为1 ng/mL时,ROS含量明显升高.qPCR检测结果显示,1 ng/mL重组TvMIF蛋白作用THP-1巨噬细胞8 h后,caspase-1、NLRP3、IL-18和IL-1βmRNA水平均显著上升.Western blotting检测结果显示,1 ng/mL重组TvMIF蛋白刺激THP-1巨噬细胞后,caspase-1和NLRP3蛋白表达量显著上升,pro-IL-1β、GSDMD和GSDMD-NT蛋白表达量显著增加;用NLRP3炎症小体特异性抑制剂MCC950预处理后,GSDMD和GSDMD-NT蛋白表达水平显著下降.结论 高浓度重组TvMIF蛋白抑制THP-1巨噬细胞凋亡;低浓度重组TvMIF蛋白激活NLRP3炎症小体,促进THP-1巨噬细胞焦亡.

关键词：阴道毛滴虫、巨噬细胞迁移抑制因子、THP-1巨噬细胞、NLRP3炎症小体、细胞凋亡、细胞焦亡

所属期刊栏目：35

分类号：R382..21(医学寄生虫学)

资助基金：国家寄生虫资源库建设项目2019-194-30

在线出版日期：2023-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：29-37