猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白真核表达及抗原表位预测
目的 对猪囊尾蚴排泄分泌抗原中差异表达蛋白富含亮氨酸重复序列结构域15(leucine-rich repeat containing 15,LRRC15)进行真核表达,并预测其抗原表位.方法 通过在线软件ExPASy-PortParam和Protean软件预测LRRC15蛋白分子质量、稳定性、氨基酸序列组成及等电点和T淋巴细胞抗原表位.采用基于PCR的精确合成(PCR-based accurate synthesis,PAS)技术设计全长拼接引物,合成LRRC15基因.构建重组质粒pcDNA3.4-LRRC15并转染至人胚胎肾细胞HEK293,表达LRRC15蛋白,并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Western blotting)鉴定.结果 成功构建了重组质粒pcDNA3.4-LRRC15,表达分子质量约70 kDa的LRRC15目的蛋白.经ExPASy-PortParam软件预测,LRRC15属于亲水性蛋白,由644个氨基酸组成,分子质量为69.89 kDa,等电点为5.6;蛋白分子式为C3073H4942N846O953S28,不稳定系数为50.3,为一种不稳定蛋白.采用Protean软件预测发现,LRRC15蛋白位于292～295、353～361、521～526、555～564位氨基酸区段具有T细胞抗原表位优势,具有亲水性高、柔韧性好、表面可及性大、抗原性指数高的表位位于122～131、216～233、249～254、333～343、358～361、368～372、384～386、407～412、445～450、469～481、553～564、588～594、607～617、624～639位氨基酸区段.将重组质粒pcDNA3.4-LRRC 15转染至HEK293细胞后,SDS-PAGE和Western blotting分析发现,在细胞分泌培养基、细胞裂解上清和沉淀中检测到LRRC15蛋白.从细胞培养基中纯化出LRRC15-His融合蛋白,SDS-PAGE显示在分子质量约为70 kDa处出现明显条带,Western blotting能够识别LRRC15重组蛋白条带.结论 成功对猪囊尾蚴排泄分泌抗原中的LRRC15蛋白进行真核表达,并对其抗原表位进行了生物信息学预测,为进一步了解该蛋白的生物学功能奠定了基础.
猪囊尾蚴、排泄分泌抗原、富含亮氨酸重复序列结构域15、真核表达、抗原表位、生物信息学预测
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R383.34(医学寄生虫学)
国家自然科学基金81960378
2022-08-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
286-291
