日本血吸虫可溶性虫卵抗原诱导小鼠巨噬细胞凋亡机制
目的 观察日本血吸虫感染过程中巨噬细胞数量及其凋亡动态变化,并探讨血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)诱导巨噬细胞凋亡的可能机制.方法 将C57BL/6小鼠(6～8周龄)随机分为4组,其中3组作为实验组,另1组作为正常对照组.实验组每只小鼠均经腹部皮肤感染(12±1)条日本血吸虫尾蚴,于感染后3、5周和8周各处死1组小鼠;正常对照组小鼠不感染血吸虫,于实验组小鼠感染当天处死.取各组小鼠肝组织和腹腔渗出细胞,检测肝脏和腹腔巨噬细胞数量及其凋亡动态变化.此外,体外用SEA、PBS及卵清蛋白(ovalbumin,OVA)处理纯化的小鼠腹腔巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞凋亡;以实时定量PCR和Western blotting技术检测巨噬细胞中BCL-2家族成员mRNA和蛋白表达水平;以流式细胞术和Western blotting技术检测caspase 3活化水平.同时,体外在caspase抑制剂、H202或N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)存在时用SEA处理巨噬细胞,以流式细胞术检测巨噬细胞凋亡水平.结果 感染日本血吸虫尾蚴后3、5周和8周,小鼠肝脏[(0.873±0.106)×106、(2.737±0.460)×106个和(3.107±0.367)×106个;F=81.900,P＜0.01]和腹腔中巨噬细胞总数[(5.282±1.136)×105、(7.500±1.200)×105个和(12.800±0.800)×105个;F=55.720,P＜0.01]不断增加,且感染小鼠肝脏[(0.092±0.018)×106、(0.186±0.025)×106个和(0.173±0.027)×106个;F=57.780,P＜0.000 1]和腹腔中凋亡的巨噬细胞数量[(0.335±0.022)×105、(0.771±0.099)×105个和(1.094±0.051)×105个;F=49.460,P＜0.01]亦不断增加.经SEA体外处理的巨噬细胞凋亡比例[(24.330±0.784)％]高于PBS[(18.500±1.077)％]及OVA[(18.900±1.350)％]处理组(P均＜0.01).经SEA和PBS处理的巨噬细胞中,Bcl-2[(1.662±0.943)vs.(1.00±0.00);t=1.215,P＞0.05],Bax[(0.711±0.200)vs.(1.00±0.00);t=2.507,P＞0.05],Bak[(1.255±0.049)vs.(1.00±0.00);t=0.897,P＞0.05]、BCL-2[(0.068±0.004)vs.(0.070±0.005);t=0.699,P＞0.05]、BAX[(0.089±0.005)vs.(0.097±0.003);t=2.232,P＞0.05],BAK[(0.439±0.048)vs.(0.571±0.091);t=2.231,P＞0.05]表达水平差异均无统计学意义.在cas-pase抑制剂存在时,SEA仍能诱导巨噬细胞凋亡(F=0.411,P＞0.05);而在H202或NAC存在时,SEA不能诱导巨噬细胞凋亡(F=11.880、9.897,P均＜0.05).结论 在日本血吸虫感染过程中,SEA可能通过促进活性氧表达而诱导巨噬细胞凋亡.
日本血吸虫、可溶性虫卵抗原、巨噬细胞、凋亡
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R383.24(医学寄生虫学)
国家自然科学基金81871675
2022-08-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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