巴西日圆线虫虫体蛋白体外诱导THP-1来源巨噬细胞极化的研究
目的 分析巴西日圆线虫虫体蛋白体外诱导人单核细胞白血病THP-1细胞来源巨噬细胞的极化方向,探索机体对巴西日圆线虫感染的免疫应答机制.方法 建立并维持巴西日圆线虫培养的实验室循环,无菌条件下收集L3和L5虫体,分别制备虫体蛋白;建立THP-1细胞体外培养体系,经500 ng/mL佛波酯(PMA)刺激培养后呈贴壁状态的M0型细胞分别采用500 ng/mL脂多糖(LPS)+ 100 ng/mL γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)+IL-13(浓度均为100 ng/mL)、L3及L5虫体蛋白(浓度均为5 mg/mL)进行刺激,同时设不加任何刺激的阴性对照组.通过显微镜镜检观察刺激后细胞形态、实时荧光定量PCR(qPCR)检测M1/M2型巨噬细胞特异性基因mRNA表达水平、流式细胞术检测巨噬细胞表面标志物及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测M1/M2型巨噬细胞分泌的细胞因子含量,观察巴西日圆线虫虫体蛋白体外诱导THP-1来源巨噬细胞的极化方向.结果 THP-1细胞经PMA刺激培养呈贴壁的M0型细胞后,经LPS+ IFN-γ刺激培养后呈特征性M1型极化;经IL-4+ IL-13刺激培养后呈特征性M2型极化;经L3和L5蛋白刺激培养后均呈特征性M2型极化.阴性对照组、LPS+ IFN-γ刺激组、IL-4+ IL-13刺激组、L3蛋白刺激组、L5蛋白刺激组间M1型巨噬细胞比例差异有统计学意义(x2=3 721.00,P＜ 0.001),其中LPS+ IFN-γ刺激组M1型巨噬细胞比例最高;各组间M2型巨噬细胞比例差异有统计学意义(x2=105.43,P＜0.001).各组间C-C基序趋化因子配体2(CCL2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-12b、过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPARγ)、IL-10、甘露糖受体C型1(Mrc1)基因mRNA表达水平差异均有统计学意义(F=191.95、129.95、82.89、11.30、9.51、12.35,P均＜0.001),各组间CD86、CD206阳性率差异均有统计学意义(x2=24 004.33、832.50,P均＜0.001).LPS+ IFN-γ刺激组IL-1β、TNF-α表达水平均显著高于IL-4+ IL-13刺激组、L3蛋白刺激组及L5蛋白刺激组(P均＜ 0.001);IL-4+ IL-13刺激组、L3蛋白刺激组和L5蛋白刺激组TGF-β1、IL-10表达水平均显著高于阴性对照组和LPS+ IFN-γ刺激组(P均＜0.05).结论 巴西日圆线虫L3和L5虫体蛋白体外均可诱导THP-1来源巨噬细胞向M2型极化.
巴西日圆线虫、L3蛋白、L5蛋白、THP-1细胞、巨噬细胞极化
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R383.13(医学寄生虫学)
江苏省科教强卫工程项目;江苏省属公益类科研院所自主科研项目;江苏省医学重点人才项目;江苏省青年医学人才项目;江苏省血地寄防应用性科研项目
2020-10-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
367-373,379
