基于重组酶介导等温扩增技术的广州管圆线虫核酸检测方法的建立
目的 建立一种基于重组酶介导等温扩增技术(RAA)的广州管圆线虫核酸检测方法.方法 选择广州管圆线虫内转录间隔区1 (ITS1)基因序列作为靶基因序列,设计、合成并筛选出特异性最强的引物和探针,构建用于广州管圆线虫核酸检测的基础及荧光RAA检测方法.分别以含检测靶基因片段序列的不同拷贝数重组质粒以及不同浓度广州管圆线虫基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增,评价其检测敏感性;分别以广州管圆线虫、曼氏血吸虫、似蚓蛔线虫、华支睾吸虫、细粒棘球绦虫、十二指肠钩口线虫及小管福寿螺和藁杆双脐螺螺体基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增,评价其检测特异性.结果 成功建立了用于广州管圆线虫核酸检测的荧光RAA法,该方法可在37℃20 min内对广州管圆线虫特异性DNA片段实现实时扩增.以含靶基因片段序列的不同拷贝数重组质粒和不同浓度广州管圆线虫基因组DNA为模板时,该法最低检出限分别为10拷贝/μL重组质粒和100 pg/μL基因组DNA;以曼氏血吸虫、似蚓蛔线虫、华支睾吸虫、细粒棘球绦虫、十二指肠钩口线虫及小管福寿螺和藁杆双脐螺螺体基因组DNA为模板,检测结果均为阴性.结论 成功建立了一种可用于广州管圆线虫核酸检测的荧光RAA法,其检测简便快速,具备较好的敏感性和特异性.
广州管圆线虫、等温扩增、重组酶、核酸检测、检测效能
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R383.19(医学寄生虫学)
江苏省科教强卫工程项目;江苏省属公益类科研院所自主科研项目;江苏省青年医学人才项目
2020-10-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
350-354
