pEGFP-N1-HBsAg-ROP2多基因重组表达质粒的构建及表达鉴定
目的 构建pEGFP-N1-HBsAg-ROP2重组质粒,并转染HEK293T细胞进行表达鉴定,为弓形虫病核酸疫苗的研制奠定基础.方法 根据HBsAg基因序列和pcDNA3-p30-ROP2重组质粒酶切位点设计引物,PCR扩增HBsAg基因,经酶切、连接、转化,利用HBsAg基因替换p30基因,构建pcDNA3-HBsAg-ROP2重组质粒;经HindⅢ和KpnⅠ双酶切,将HBsAg-ROP2片段与pEGFP-N1真核表达载体相连,构建pEGFP-N1-HBsAg-ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞,观察其蛋白表达水平.结果 HBsAg片段PCR产物约700 bp,与理论值相符;构建pcDNA3-HBsAg-ROP2重组质粒,双酶切电泳后得到约5.4 kb和1.9 kb的两条带,与预期结果相符.pEGFP-N1-HBsAg-ROP2双酶切后产生约4.7 kb和1.9 kb的条带,经测序鉴定,与GenBank发表的序列同源性为99.84%.目的基因已成功转染入HEK293T细胞中,且正确表达,蛋白浓度为3.08 mg/ml.结论 成功构建pEGFP-N1-HBsAg-ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞能正确表达.
弓形虫病、乙型肝炎、pEGFP-N1、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)、质粒构建
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R531.8(寄生虫病)
国家自然科学基金81501770;山东省自然科学基金ZR2015YL051、2009ZRC03083;山东省医药卫生科技发展计划项目2014WS0330;山东省医科院医药卫生科技创新工程
2018-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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