细粒棘球绦虫转酮醇酶克隆表达及免疫性分析

摘要：

目的 通过原核表达获得细粒棘球绦虫转酮醇酶(TK)表达产物,分析其作为棘球蚴病诊断抗原分子的价值.方法 PCR扩增TK基因,克隆至原核载体pMD19-EgTK,随后亚克隆至表达载体pET-28a,构建目的基因TK原核表达质粒pET-28a(+)-EgTK,转入大肠埃希菌BL21,分离纯化蛋白,经SDS-PAGE、Western blotting鉴定后,收集细粒棘球蚴病(CE组)、多房棘球蚴病(AE组)患者及健康人(健康组)血清,以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测重组蛋白作为诊断抗原的价值.结果 成功构建pET-28a(+)-EgTK质粒,经SDS-PAGE和Western blotting分析,EgTK蛋白在70 kDa处出现条带,与理论值一致.ELISA显示,CE组、AE组和健康组血清反应吸光度A450值间差异有统计学意义(F=44.47,P<0.01), CE组(1.46±0.41)、AE组A450值(1.28±0.29)高于健康组(0.66±0.23)(P<0.05),但CE组和AE组间A450值差异无统计学意义(P>0.05).结论 重组TK分子可较好地区分棘球蚴病患者和非棘球蚴病患者,但无法区分细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者.

关键词：细粒棘球绦虫、棘球蚴病、转酮醇酶、重组质粒、诊断抗原

所属期刊栏目：30

分类号：R383.33(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金81360255;青海省科技厅重大专项2016-SF-A5

在线出版日期：2018-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：155-160